1. 如何檢測細胞的增殖活性，簡要描述實驗步驟
細胞增殖檢測方法 細胞增殖檢測通常是檢測分裂中的細胞數量或者細胞群體發生的變化。目前細胞增殖檢測主要分為五類：DNA合成檢測、代謝活性檢測、細胞數量檢測、細胞增殖相關抗原檢測和ATP 濃度檢測。在這些方法中作何選擇，主要取決於所研究的細胞類型和研究方案。 1. DNA合成檢測 這是目前實驗室中檢測細胞增殖最准確可靠的方式。該法是將放射性標記的3H-胸腺嘧啶與細胞一同孵育，這樣新增殖細胞的DNA中就會摻入放射性標記，經洗脫後可用閃爍計數器檢測。該方法耗時長，而且有個明顯的弊端就，即使用和處理放射性物質既麻煩又不安全。不過，可以使用5-溴-2-脫氧尿苷BrdU來進行類似實驗，因為BrdU也同樣可以摻入到新合成的DNA中。但這樣就需要進行額外的實驗步驟，先孵育特異性BrdU單抗和帶標記的二抗，然後再進行比色法、化學發光檢測或熒光信號檢測等步驟。該方法的優點就是不再需要放射性物質。BrdU標記很適合免疫組化IHC、免疫細胞化學IC、細胞內ELISA、流式細胞分析和高通量篩選。 2. 代謝活性檢測 檢測細胞群體的代謝活性也可以反映細胞增殖的情況。在細胞增殖過程中脫氫酶的活性會增加，因此其底物四唑鹽或Alamar Blue在代謝活躍的細胞環境中會逐漸減少，形成能夠改變培養基顏色的甲臢染料。可以通過低配置或高配置的分光光度計和酶標儀來讀取含染料培養基的吸光度，從而衡量細胞的代謝活性，檢測細胞增殖的情況。 四種最常見的四唑鹽是：MTT、XTT、MTS和WST1。MTT在標準的細胞培養基中是不溶的，而且其生成的甲臢晶體需要溶解在DMSO或者異丙醇中。因此，MTT主要作為終點檢測方法。其他三種鹽與Alamar Blue一樣，都是可溶且無毒。它們可以作為連續監控手段來跟蹤細胞增殖的動態改變。其中XTT的效率較低，需要添加額外的因子；WST1更靈敏有效，與其他鹽相比能夠更快顯色；Alamar Blue的靈敏度也很高，只要微孔板的孔中有100個細胞就能夠檢測到。四唑鹽和Alamar Blue氧化還原染料能夠用於多種儀器和高通量研究，非常方便。它們適用的檢測儀器包括：標准分光光度計、熒光分光光度計和酶標儀等。
2. 細胞周期和細胞增殖的檢測是否為同一指標
不是同一指標.
細胞增殖檢測的是一定數量的細胞經過一段時間的增殖後所產生的細胞數量（絕對細胞數量或相對細胞數量,根據檢測方法而定）,反映的是細胞生長（增殖）的速度,不能檢測出細胞群中G0/G1、S、G2/M等各期細胞的比例.
細胞周期檢測的是細胞群中G0/G1、S、G2/M各期細胞的比例,不能直接反映細胞的增殖速度.
3. 國內哪家幹細胞機構比較好
幹細胞是我們機體的起源細胞，是可形成人體內各種細胞、器官的原始細胞。幹細胞也是一種未充分分化，尚不成熟的細胞，具有再生各種組織器官和人體的潛在功能。通過細胞分裂的方式復制自身，從而補充受損或凋亡的組織細胞，在特定的生理或體外誘導條件之下，可以分化成具有不同功能的成熟細胞。
幹細胞的作用和功效
1、替代和修復死亡和受損傷的細胞
這些細胞具有自動歸巢的特點，注入人體後，可聚集至受損器官及相關部位，並分化成特定細胞。幹細胞注入人體後，新細胞和組織在目標組織的微環境下生長，受損組織得到修復。利用幹細胞自身分化功能生長新組織細胞，彌補組織細胞老化、死亡、損傷，使病變組織和細胞恢復正常。加入新血管，形成微循環，改善損傷組織。
2、旁分泌作用
在向組織內注入幹細胞後，可產生多種生物活性因子，如神經營養因子、抗凋亡因子等多種因子(如神經營養因子、細胞因子)、調節肽、氣體信號分子等，並能對周圍細胞起作用。能促進細胞增殖，抑制功能細胞凋亡，將現有組織祖細胞分化為組織細胞，修復受損組織，生長新組織。
3、激活休眠和處於抑制狀態的細胞
機體的生長和發育是通過細胞分裂來完成的，當細胞分裂時，一部分脫離了正常的細胞周期，表現為功能性睡眠。有些細胞受內因子的影響，生長受抑制。這類處於休眠或被抑制狀態的細胞不再分裂、增殖，僅進入老化代謝過程，導致人體新生細胞減少，新陳代謝減慢，人體進入衰老階段。隨著年齡的增長，幹細胞將年輕的信號傳遞給脫離細胞周期的成年細胞。休眠及受幹細胞刺激的抑制態細胞激活後，再進入細胞周期，通過分裂增殖，增加體內新生細胞數，使人體代謝過程恢復正常甚至逆轉。
4. 測定細胞增殖用CCK8好不好
細胞增殖的研究方法有很多，主要包括：BrdU，EdU，CCK8等方法。其中EdU檢測方法是最新的細胞增殖檢測方法。
EdU是一種胸腺嘧啶核苷類似物，能夠在細胞增殖時期代替T滲入正在復制的DNA分子，通過基於EdU與Apollo®熒光染料的特異性反應檢測DNA復制活性，通過檢測EdU標記便能准確地反映細胞的增殖情況。與BrdU檢測方法相比，EdU檢測方法更快速、更靈敏、更准確。EdU檢測染料只有BrdU抗體大小的1/500，在細胞內很容易擴散，無需DNA變性（酸解、熱解、酶解等）即可有效檢測，可有效避免樣品損傷，在細胞和組織水平能更准確地反映細胞增殖等現象。
5. MTS法測定細胞增殖的原理該方法與MTT法有何不同
MTS法原理：被測物質溶液的顏色或加入顯色劑後生成的有色溶液的顏色，顏色深度和物質含量成正比，則根據光被有色溶液吸收的強度，即可測定溶液中物質的含量。
跟MTT法區別如下：
一、指代不同
1、MTT法：利用有色物質對特定波長光的吸收特性來進行定性分析的一種方法。
2、MTS法：是一種檢測細胞存活和生長的方法。
二、原理不同
1、MTT法：為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲臢（Formazan）並沉積在細胞中，而死細胞無此功能。
2、MTS法：以生成有色化合物的顯色反應為基礎，比色分析對顯色反應的基本要求是：反應應具有較高的靈敏度和選擇性，反應生成的有色化合物的組成恆定且較穩定，它和顯色劑的顏色差別較大。選擇適當的顯色反應和控制好適宜的反應條件，是比色分析的關鍵。
三、用途不同
1、MTT法：方法已廣泛用於一些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤葯物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經濟。
2、MTS法：採用具有分光系統(單色器)及檢測器的分光光度計，使測定結果准確、省時，選擇性好。
參考資料來源：搜狗網路-比色法
參考資料來源：搜狗網路-MTT法
6. MTS法測定細胞增殖的原理該方法與MTT法有何不同
MTS法原理：被測物質溶液的顏色或加入顯色劑後生成的有色溶液的顏色，顏色深度和物質含量成正比，則根據光被有色溶液吸收的強度，即可測定溶液中物質的含量。
跟MTT法區別如下：
一、指代不同
1、MTT法：利用有色物質對特定波長光的吸收特性來進行定性分析的一種方法。
2、MTS法：是一種檢測細胞存活和生長的方法。
二、原理不同
1、MTT法：為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲臢（Formazan）並沉積在細胞中，而死細胞無此功能。
2、MTS法：以生成有色化合物的顯色反應為基礎，比色分析對顯色反應的基本要求是：反應應具有較高的靈敏度和選擇性，反應生成的有色化合物的組成恆定且較穩定，它和顯色劑的顏色差別較大。選擇適當的顯色反應和控制好適宜的反應條件，是比色分析的關鍵。
三、用途不同
1、MTT法：方法已廣泛用於一些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤葯物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經濟。
2、MTS法：採用具有分光系統(單色器)及檢測器的分光光度計，使測定結果准確、省時，選擇性好。
7. 檢測細胞增殖的方法有哪些
目前主要有兩種用於檢測細胞增殖能力的方法。一種是直接的方法，通過直接測定進行分裂的細胞數來評價細胞的增殖能力。另一種是間接的方法，即細胞活力（cell viability）檢測方法，通過檢測樣品中健康細胞的數目來評價細胞的增殖能力。顯然，細胞活力檢測法並不能最終證明檢測樣品中的細胞是否在增殖。如細胞在某一培養條件下會自發啟動凋亡程序，但葯物的干擾可抑制凋亡的發生；這時若採用細胞活力檢測法，顯然可以區分兩種條件下的細胞數量，但我們並不能從葯物干擾組細胞數大於對照組的事實說明葯物可促進細胞增殖的結論。所以最直接的證據應該採用方法一。
用於檢測細胞增殖能力最經典的方法是用氚標記的胸腺嘧啶核苷處理細胞，再檢測DNA鏈中氚含量。若細胞具有增殖能力，DNA合成過程中將會採用氚標記的胸腺嘧啶核苷作為合成原料，因此檢測細胞DNA鏈內標記核苷酸的量可判斷細胞是否進行DNA的合成。
但更為常用的方法是BrdU檢測法。用BrdU預處理的細胞中，BrdU可代替胸腺嘧啶核苷插入復制的DNA雙鏈中，而且這種置換可以穩定存在，並帶到子代細胞中。細胞經過固定和變性處理後，可用免疫學方法檢測DNA中BrdU的含量（如採用鼠抗BrdU單克隆抗體特異識別BrdU,再採用辣根過氧化酶標記的山羊抗鼠IgG二抗標記，最後用比色法或熒光的方法進行定量測定），從而判斷細胞的增殖能力。
Calbiochem/EMD公司提供一種BrdU檢測試劑盒，以微孔板的形式，合並所有清洗、固定、變性的步驟以單一試劑當中。比色檢測在一抗二抗標記後在450nm下讀數，所有操作在3小時內結束。而且該試劑盒的靈敏度與市場上其他同類產品相比是最強的。1000個細胞以上水平的檢測只需用BrdU預孵育2小時，100個細胞則採用過夜預孵育，即可檢測細胞的增殖能力。
BrdU法的一個缺點是需要固定和變性等破壞DNA的處理。有些情況下，研究者可能希望在測定細胞增殖能力的同時檢測細胞的總DNA含量，然而，在變性條件下，DNA的雙鏈結構將被破壞，DAPI和Hoechest 33342等核酸標記探針就不再能識別DNA，因而也無法估計DNA總量。Molecular Probes公司的Click-iT EdU(5－乙炔－2'－脫氧尿嘧啶)檢測試劑盒可以解決這個問題。這種方法不需要變性步驟，因為熒光探針標記的疊氮化物小分子，而不是龐大的抗體分子，可以很輕易的識別並結合未變性DNA雙鏈中的EdU分子。
採用BrdU方法時，你必須非常小心的去對DNA進行變性，才能一方面使BrdU抗體進入細胞，另一方面又保留足夠的雙鏈DNA分子來進行細胞周期的分析。有了EdU後則不同，由於你不再需要變性，這一切都很簡單了；另外，常常用於DNA變性的HCl，可能破細胞內壞蛋白的抗原識別位點，因而限制了BrdU檢測法中同時檢測其他蛋白的應用，但這種情況在EdU法中不存在。
圖1：EdU及BrdU原理示意圖（摘至invitrogen說明書）
在一些情況下，細胞活力的檢測相當於細胞增殖能力的測定。用於細胞活力檢測的方法又很多，這些方法主要採用特殊的試劑來測定細胞的代謝活力，Alamar Blue，MTT及其他四唑鹽。它們通過檢測細胞的氧化還原活性來檢測細胞增殖能力，所以這是一種間接的方法。
Calbiochem的快速細胞增殖試劑盒，或者，嚴格來說，叫細胞活力試劑盒，採用一種四唑鹽試劑WST-1來對細胞活力進行快速的檢測。線粒體剪切WST－1試劑，產生一種水溶性的formazan鹽，所以這是一種相對可靠的測定健康細胞活力的方法。一種類似的但更為靈敏的方法是Calbiochem公司的超敏細胞增殖試劑盒，採用calcein-AM（一種熒光探針）來標記細胞。這種增加的靈敏度來自於額外的檢測步驟，即採用PBS替代培養基或血清來減小背景。
Invitrogen公司還提供了一種採用熒光素酶檢測細胞內ATP水平的方法。健康細胞中熒光素激發出的光可以很容易讀出，並且具有非常小的背景。無熒光信號表明細胞線粒體不在產生ATP。因此，這些方法當然也可用於細胞毒性檢測實驗。
細胞增殖檢測方法：總論
一、胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）滲入法
胸腺嘧啶核苷（TdR）是DNA特有的鹼基，也是DNA合成的必需物質。用同位素3H標記TdR即3H-TdR作為DNA合成的前體能摻入DAN合成代謝過程，通過測定細胞的放射性強度，可以反映細胞DAN的代謝及細胞增殖情況。但是具有放射性。
二、MTT檢測法
MTT檢測法主要反映細胞的能量代謝，是檢測細胞增殖活力的一種簡便准確的方法，其原理是在活細胞生長和增殖過程中，線粒體內的脫氫酶可將黃色的MTT分解成蘭紫色的甲（Formazan），生成的甲量的多少與細胞的數量和細胞的活力成正比
三、羥基熒光素二醋酸鹽琥珀醯亞胺脂（CFSE）檢測法
羥基熒光素二醋酸鹽琥珀醯亞胺脂（CFSE）是一種可穿透細胞膜的熒光染料，具有與細胞特異性結合的琥珀醯亞胺脂基團和具有非酶促水解作用的羥基熒光素二醋酸鹽基團，使C E成為一種良好的細胞標記物。CFSE進入細胞後可以不可逆地與細胞內的氨基結合偶聯到細胞蛋白質上。當細胞分裂時，CFsE標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，因此其熒光強度是親代細胞的一半。這樣，在一個增殖的細胞群中，各連續代細胞的熒光強度呈對遞減，利用流式細胞儀在488nm激發光和熒光檢測通道可對其進行分析。
四、Br檢測法
Br中文全名5-溴脫氧尿嘧啶核苷，為胸腺嘧啶的衍生物，可代替胸腺嘧啶在DNA合成期（S期），活體注射或細胞培養加入，而後利用抗Br單克隆抗體，ICC染色，顯示增殖細胞。同時結合其它細胞標記物，雙重染色，可判斷增殖細胞的種類，增殖速度，對研究細胞動力學有重要意義。