㈠ 微生物的菌種鑒定方法與步驟（鑒定到「株」一級）
首先如果你的菌株是自然界中分離得到，就只能鑒定到種，不能鑒定到株，因為多多少少和其他株系的細菌有區別，即便你做了一些特徵的鑒定，發現和某一株細菌一模一樣，你也沒有理由說你的細菌就是那一株細菌，因為你不可能把所有的特徵都做完，株和株之間的關系就相當於不同的人之間的關系，世界上不可能有完全相同的兩個人。除非你知道你的細菌本來就是某一株細菌擴增出來的（而且要保證沒有變異，否則就是一個新株），可是這樣就沒必要鑒定了。
菌種鑒定一般就只要提取基因組DNA，然後PCR擴增16srDNA片段，上GeneBank或者Eztaxon對比即可。一般序列相似度在97%以上就可以認為是同種細菌（當然也有例外，DNA序列僅僅是一個參考指標）。
㈡ 微生物鑒定的基本步驟是什麼 只鑒定到株即可
分離菌株 擴增培養 製片觀察形態 必要時進行染色 之後是生化試驗 根據不同菌株會有不同實驗 比如說 Vit實驗 等
㈢ 微生物的鑒定方法
如果只鑒定一株兩株的話，建議直接拿到微生物研究所去鑒定。我們實驗室之前鑒定一株黑麴黴，大概價格在1000-2000之間。其實方法很簡單，採用分子生物學的方法對其18sRNA進行鑒定，如果自己會做的話原理也很簡單，就是整個流程還是比較麻煩的。傳統的微生物鑒定法要鑒定很多步，也比較耗時。
㈣ 應用質譜儀鑒定細菌需要多長時間
基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜(matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)是20世紀80年代發展起來的一種新型軟電離有機質譜, 作為一種新興的蛋白質組學檢測技術, 現已廣泛應用於生命科學及相關領域。同時作為一項新興的微生物鑒定技術, 受到了國內外的廣泛關注。與傳統的生化表型鑒定方法和分子生物學方法相比, MALDI-TOF MS具有操作簡單、快速、准確和經濟的特點。早在1975年, ANHALT等[1]利用質譜儀結合高溫裂解技術第1次完成了細菌的鑒定, 從此拉開了質譜鑒定細菌的「 序幕」 。隨著質譜檢測技術的不斷完善和發展, 近年來, MALDI-TOF MS已經成功應用於微生物的鑒定, 顯示了其在細菌、酵母菌等鑒定方面均具有良好的應用價值。眾多的研究表明, MALDI-TOF MS技術對培養出的純菌落進行菌種鑒定具有很高的穩定性及准確性, 對常見細菌和酵母菌的屬的鑒定率能達到97%~99%, 種的鑒定率也能達到85%~97%; 另外, MALDI-TOF MS大大縮短了細菌鑒定的時間, 而且其成本也較常規鑒定方法低[2, 3]。除此之外, MALDI-TOF MS已經能夠成功地用於部分微生物亞種水平的鑒定和細菌耐性的檢測, 但這種方法在大多數情況下是應用於培養出的純菌落的鑒定[3]。
如果能夠從臨床樣本中直接檢測細菌/真菌, 突破細菌/真菌培養陽性率低、培養時間長的瓶頸, 為細菌/真菌感染性疾病的診療提供更快、更准確的病原學依據, 將對臨床及時控制細菌/真菌感染性疾病起到更大的作用。國內外學者已嘗試將質譜技術應用於臨床樣本的直接檢測, 並取得了顯著的進展。本文就MALDI-TOF MS技術在臨床樣本的直接檢測應用作一綜述。
一、MALDI-TOF MS檢測原理
MALDI-TOF MS技術用於微生物鑒定的實質就是檢測具有屬、種或亞型特異性的生物標志的質量信號, 主要是微生物菌體內高豐度、表達穩定和進化保守的核糖體蛋白。MALDI-TOF MS 儀器主要由基質輔助激光解吸離子源(MALDI)和飛行時間質量檢測器(TOF)兩部分組成。MALDI的原理是用一定強度的激光照射樣本與基質形成的共結晶薄膜, 基質從激光中吸收能量而汽化, 並迅速降解, 使樣本分解吸附, 基質和樣本之間發生電荷轉移從而使樣本分子發生電離; TOF的原理是帶有電荷的樣本分子在電場作用下加速飛過飛行管道, 因為離子的質荷比與離子的飛行時間呈正比, 所以不同質量的離子因達到檢測器的飛行時間不同而被檢測, 以離子峰為縱坐標、離子質荷比為橫坐標形成特徵性的質量圖譜。將不同種屬微生物經MALDI-TOF分析所形成的質量圖譜與資料庫中的參考圖譜進行比較, 從而實現對目標微生物種或菌株的區分和鑒定[2]。
二、MALDI-TOF MS直接檢測臨床樣本的流程
臨床樣本直接檢測的流程主要包括3個部分:臨床樣本的預處理、樣本上機檢測和對比蛋白質指紋圖譜資料庫得出鑒定結果。由於目前報道最多的臨床樣本是陽性血培養瓶和中段尿樣本, 下面將以這二者為例介紹其直接檢測的流程, 其它臨床樣本的檢測流程與之類似。
(一)臨床樣本預處理
MALDI-TOF MS直接用於臨床樣本的檢測有2個基本的要求:(1)臨床樣本中細菌的量。為了得到准確的鑒定圖譜, MALDI-TOF MS技術對置於靶板上的細菌的最低檢測限約為(1× 10^4)~(1× 10^6)cfu/mL。若要直接檢測擬似血流感染的血液樣本以及擬似泌尿系統感染的中段尿等臨床樣本中的病原菌, 首先必須富集細菌; (2)臨床樣本的質。由於血液和血培養瓶中的大分子成分如血紅蛋白和其它蛋白成分、尿液中的白細胞等有機成分會干擾細菌的譜峰, 所以直接檢測前需要採取預處理措施去除這些干擾因素。
1.陽性血培養瓶直接檢測 直接檢測陽性血培養瓶的細菌濃度常常需要1× 10^7 cfu/mL[2, 4]。由於在血流感染患者血液中的細菌量常常很低(最低可< 1~10 cfu/mL), 因此對血樣本的直接檢測需要一個增菌的過程, 即採用血培養瓶增菌。目前已報道的陽性血培養病原菌預處理程序各不相同, 但預處理過程主要包含了以下2個步驟:(1)將細菌從血細胞中分離出來。先應用溫和去污劑(如吐溫-80、十二磺基硫酸鈉、皂素等)將血液中的血細胞溶解, 然後通過不同的流程(離心、洗滌)去除其它的干擾因素, 純化要鑒定的細菌樣本; (2)將菌體中的蛋白質抽提出來。最常用的是混合溶劑處理法, 使用甲酸/乙腈溶液對樣本進行處理來抽提蛋白, 利用2種溶劑的混合作用將菌體表面的蛋白和存在於細胞
㈤ 做微生物時，培養時間超過規定時間，還是只是菌落變大
判定有無細菌生長：
細菌正常培養需要觀察5到7天,結核培養需要30天
微生物鑒定培養是劃完碟子以後需要24小時的孵育時間細菌生長,
要看你培養什麼,超時多久,培養基的養分等等.一般情況下超時會導致菌落不純或被自身代謝產物
㈥ 細菌培養及鑒定需要幾天
得看具體的菌株和鑒定方法，一般的真菌，5至7天能長好形態均勻的菌落；鑒定的話，形態鑒定比較復雜，分子鑒定較為簡便，一般一天能搞定
㈦ 微生物培養超過一個月還能進行基因鑒定嗎
不能。微生物培養七天內基因活躍，容易進行基因鑒定，而微生物培養超過一個月基因活性降低，無法進行基因鑒定。微生物包括，細菌、病毒、真菌以及一些小型的原生生物、顯微藻類等在內的一大類生物群體，它個體微小，與人類關系密切。