⑴ 如何檢測一個細胞中的蛋白質表達量
如何檢測一個細胞中的蛋白質表達量
蛋白質分子中關鍵活性部位氨基酸殘基的改變,會影響其生理功能,甚至造成分子病(molecular disease)。例如鐮狀細胞貧血,就是由於血紅蛋白分子中兩個β亞基第6位正常的谷氨酸變異成了纈氨酸,從酸性氨基酸換成了中性支鏈氨基酸,降低了血紅蛋白在紅細胞中的溶解度,使它在紅細胞中隨血流至氧分壓低的外周毛細血管時,容易凝聚並沉澱析出,從而造成紅細胞破裂溶血和運氧功能的低下。另實驗證明,若切除了促腎上腺皮質激素或胰島素A鏈N端的部分氨基酸,它們的生物活性也會降低或喪失,可見關鍵部分氨基酸殘基對蛋白質和多肽功能的重要作用。
所謂「分子病」,首先是蛋白質一級結構的改變,從而引起其功能的異常或喪失所造成的疾病。可見蛋白質關鍵部位甚至僅一個氨基酸殘基的異常,對蛋白質理化性質和生理功能均會有明顯的影響。分子病是基因突變引起的遺傳性疾病,當然首先就是DNA分子結構的改變,是其分子編碼相應蛋白質基因結構的改變,這是 1949年美國科學家Pauling在研究血紅蛋白時首先提出來的。目前已知血紅蛋白分子異常有500多種,其中約一半在臨床上可造成分子病。分子病也包括整條多肽鏈在合成時的缺失,如血紅蛋白分子病中的地中海貧血,可缺失血紅蛋白α-亞基或β-亞基等。現在已知人類有幾千種先天遺傳性疾病,其中大多是由於相應蛋白質分子異常或缺失所致。
⑵ L-谷氨酸鈉是什麼,有什麼用途啊
谷氨酸鈉(C5H8NO4Na)就是味精的主要成分,不穀氨酸是一種氨基酸,而鈉是一種金屬,谷氨酸鈉是一種由鈉離子與谷氨酸根離子形成的鹽。說得更簡單一些,如果熬湯的時候,您熬的不是青菜豆腐湯,而是一鍋雞湯的話,您可能會有這種經驗——往雞湯中加一些聖僧鹽,味道會更加鮮美。這是因為雞肉當中富含谷氨酸這種氨基酸,您又放了一些氯化鈉鹽進去,便在不知不覺當中就製造了谷氨酸鈉,也就是味精。
L-谷氨酸—鈉就是我們常用的味精或味素的重要組成部分,因此,味精的學名也稱為L-a-氨基戊二酸-鈉鹽,簡稱為MSG,它屬於氨基酸鹽類,含有一分子結晶水。味精的閾值(即味覺感官能嘗出味的最低濃度)為0.03%,因而商品名稱為「味精」。
我國食用味精,是以澱粉為主要原料,通過「發酵法」製成的。分為晶體和粉狀兩種。目前我國味精產品的規格,其谷氨酸鈉鹽的含量分別為99%、95%、92%、90%、80%等。其中規格為99%的味精,不加食鹽,其內部結晶水含量為1%;其它規格的味精均需添加一定量的精製食鹽。
味精除呈鮮味外,還能抑制鹽味和苦味,減少甜膩味,增強整個菜餚的風味,具有調制食品自然風味的作用。因此,味精被稱為菜餚風味的強化劑。
味精不僅是呈味劑,還是人體和動物的營養物質。其營養價值和生理作用主要有:
(1)增加食慾。科學已證明,在人體的味覺器官中,存在著專門的谷氨酸受體部位,這種鮮味與酸、甜、苦、鹹味對機體同樣重要。味精進入腸胃後,很快分解出谷氨酸,在人體代謝過程中與酮酸發生氨基酸轉移作用,合成其它氨基酸,供機體組織利用。
(2)參與腦內蛋白質和糖代謝,促進腦細胞氧化過程,改善中樞神經系統的功能。腦組織只能氧化谷氨酸,而不能氧化其它氨基酸。當葡萄糖供給不足時,谷氨酸可作為腦組織的能源,是精神疾病患者的中樞神經及大腦皮質的補劑。
但是,在使用味精時,一時求鮮,而過多投放,不但起不到調味作用,反而會影響菜餚的本味,產生一種似咸非咸、似澀非澀的怪味。此外,味精食用過量也是一種浪費,而且還會給人體的代謝器官增加負擔。
味精最適用濃度為0.12%-0.5%,但有些菜或湯用量0.05%也就可以了。
合適的使用量,不但對人體無害,反而有益 健康 !
簡單的說,谷氨酸鈉就是味精,干什麼用的,自己去開發。其他那些咬文嚼字的東西我就不去復制粘貼了。
就是味精,谷氨酸鈉(C5H8NO4Na),化學名α-氨基戊二酸一鈉,是一種由鈉離子與谷氨酸根離子形成的鹽。其中谷氨酸是一種氨基酸,而鈉是一種金屬元素。生活中常用的調味料味精的主要成分就是谷氨酸鈉。
一. L-谷氨酸鈉是一種化學物質,外觀與性狀:白色結晶粉末。熔點:232°C
二. 用途:
1.調味劑。一般用量為0.2%~0.5%。除單獨使用外,宜與核糖核苷酸和肌苷酸鈉之類核酸類調味料配成復合調味料,以提高效果。
2.L-谷氨酸鈉是國內外應用最為廣泛的鮮昧劑,與食鹽共存時可增強其呈味作用,與5'-肌苷酸鈉或5'-鳥苷酸鈉一起使用,更有相乘的作用。我國規定可在各類食品按生產需要適量使用。
3.L-谷氨酸廣泛存在於動植物的機體中,是食品中天然存在的營養成份。
4.L-谷氨酸鈉用作化學鍍絡合劑。
說到谷氨酸鈉,該物質是一種由鈉離子與谷氨酸根離子形成的鹽。1866年,德國化學家卡爾·海因里希·利奧波德·瑞特豪森將小麥麩用硫酸水解而得到的酸性氨基酸。1908年,日本科學家池田菊苗博士利用海帶單獨分離出味美成分,並證明了這種味美成分就是谷氨酸鈉鹽,從而生產化學調味料投放市場。生活中常用的調味料味精的主要成分就是谷氨酸鈉。西紅柿、發酵的大豆製品、酵母提取物、某些尖乳酪,以及發酵或水解蛋白質產品(如醬油或豆醬)所能帶來的調味作用中,部分歸功於谷氨酸的存在。
它的物理性質 外觀上無色至白色稜柱狀結晶或白色結晶性粉末,水溶液無色 。熔點在225℃ ,沸點在333.8ºC 。氣味上基本無特殊氣味(味覺閾值0.014%) 味覺上具有強烈的肉類鮮味,略有甜味或鹹味 光學活性上谷氨酸鈉分子結構中含有一個不對稱碳原子,具有光學活性,能使偏振光面旋轉一定角度 可溶性易溶於水,微溶於乙醇,不溶於乙醚。化學性質上對光和熱穩定,10%水溶液在pH值6.9時通氣條件下100℃加熱3h分解率約0.6%。加熱至120℃脫水縮合。在酸性環境中,谷氨酸鈉會生成谷氨酸或谷氨酸鹽酸鹽;在鹼性環境中,谷氨酸鈉會起化學反應產生一種叫谷氨酸二鈉的物
質。
生活中我們最常用的味精就成份就是谷氨酸鈉,食用味精在正常范圍內不會對 健康 有任何損害,但食用過多會使部分人出現頭痛,面紅,多汗,面部壓迫或腫脹,口部或口周麻木、胃部燒灼感及胸痛等中毒症狀,中毒以後可每天口服50毫克維生素B6緩解症狀。谷氨酸鈉在120℃的溫度下會形成焦谷氨酸鈉,民眾一般認為,焦谷氨酸鈉不僅鮮味很低,而且具有一定的毒性,是致癌物質。但是科學家經過實驗研究,發現焦谷氨酸鈉能提高人的記憶力,並且不是致癌物質。只要我們每天不是過量食精,是可以讓我放心使用的。
L-谷氨酸鈉是什麼,有什麼用途啊? 谷氨酸鈉(C5H8NO4Na)就是味精的主要成分!!!!! 苯甲酸鈉 Sodium benzoate 又稱 :安息香酸鈉。 產品規格:工業級、食品級 [分子式]:C7H5NaO2 [性狀]:白色顆粒或結晶性粉末。無氣味,有甜澀味。 [用途]:化學分析用試劑;用於醫葯工業和植物遺傳研究
味精的主要成分,提鮮
就是味精
味精的成分:
味精是一種白色晶體,又名叫谷氨酸鈉,化學名稱為L-谷氨酸單鈉一水化合物,英文縮寫為MSG.味精是由大豆蛋白、小麥麵筋或其它含蛋白較多的物質中提煉的,也有用澱粉發酵製成.味精是調味品,也是營養品,食後可直接被人體吸收,成為人體細胞的基本組成部分.國家規定,商品名稱為味精或味素的,其谷氨酸鈉含量應在99%以上.
味精的生產過程:
目前我國多採用發酵法生產味精,首先要將各種糧食製成澱粉,然後將澱粉進行糖化,加入菌種進行發酵產生谷氨酸,再經過等電育晶、冷卻分離、中和除鐵脫色結晶、分離、乾燥等工序便製成了純度很高的谷氨酸鈉,即味精.
味精如何產生「鮮味」 :
味精的重要功能在於它能產生「鮮味」.人的味覺器官中存在著專門的氨基酸受體.當味精被人們食用時,刺激位於舌部味蕾的氨基酸受體,就能使人感受到可口的鮮味.
食用味精對人體有何作用
味精屬於安全有益的調味品,人們可按各人喜愛攝取,聯合國糧農及食品添加劑法規委員會早已決定取消味精食用限量.
1987年3月17至22日,荷蘭海牙召開的十九屆聯合國糧食及世界衛生組織食品添加劑法規委員會會議上作出決議,取消每天攝取6克至7.5克味精(MSG)的食用限量規定.這項決議意味著作為食品風味增強劑的味精,人們可以無疑慮地按各人喜愛程度攝取.美國食品與葯物管理局在收集了大量的文獻和試驗數據後,提出「在現在的使用量、食用方法下,長期食用味精對人體沒有什麼損害障礙」.
各國專家經過幾十年的動物生化生理學研究及顧客進行廣泛的問卷式調查,提出大量科學證據,證明味精屬於人體所需的重要營養品之一,是存在人類食物及人體本身的天然物質,人體攝入味精可以完全消化、吸收並進行正常的生化代謝.
我國食品添加劑食用衛生標准規定,味精作為增鮮劑可以用於各類食品,其最大食用量按正常生產需要,無須提出每日允許攝入量標准.中國中醫研究院已對我國味精產品進行了長期毒性試驗,再次證明味精是安全的.
「味精症狀」的由來
食用味精在我國非常普遍,幾乎每家用味精烹調,更是飯店餐館的廚師們不能缺少它,炒菜做湯,只要加入少量,就可以大大增加鮮味.但在20世紀80年代,國際上掀起了一股所謂「中國餐館病」,什麼吃了中餐有頭痛、臉發麻、口渴、胃腸不適等病症,以後又說這是由於中餐菜餚中味精引起的,故有「味精症狀」的說法,以致有些西餐館掛牌標明「本餐館不用味精」,諸如此類,在國際上引起一場爭議.
正確使用味精,無需杞人憂天
人們正確地認識味精,充分發揮它的作用是一個十分關鍵的問題.味精易溶於適宜溫度的水,但溫度過高,味精會變為焦谷氨酸鈉,不但沒有鮮味,而且還會產生輕微毒性.10%的味精水溶液在100攝氏度分別煮1、2、3小時,鮮味損失率分別為0.6%、1.1%、2.1%.所以在烹飪時一般在起鍋裝盤之前加入味精效果最好,菜餚的味道會更加鮮美.
拌冷盤加味精效果也不好,因為溫度低,很難溶解,必要時可先用少許熱水化開,晾涼後澆入冷盤.味精不能用於鹼性或酸性食品,在鹼性溶液中,味精會引起化學變化,產生一種具有不良氣味的谷氨酸二鈉,而失去調味作用;把味精放在酸性菜餚中(如醋溜魚片等),酸性越大越不易溶解,效果也越差. 應該說,任何營養物質均應適量食用才有益於 健康 .目前我國人均消費味精每年不到50克,而且菜餚中過量加入味精會產生一種似咸非咸、似澀非澀的怪味,使菜餚無法食用,所以「味精症狀」、「味精緻癌」是根本沒有道理的,味精不是「害人精」
⑶ 谷氨酸的作用是什麼,有哪些用途
主要用途:
1、醫學上谷氨酸主要用於治療肝性昏迷,還用於改善兒童智力發育。食品工業上,味精是常用的食品增鮮劑,其主要成分是谷氨酸鈉鹽。過去生產味精主要用小麥麵筋(谷蛋白)水解法進行,現改用微生物發酵法來進行大規模生產。
2、谷氨酸是生物機體內氮代謝的基本氨基酸之一,在代謝上具有重要意義。L-谷氨酸是蛋白質的主要構成成分,谷氨酸鹽在自然界普遍存在的。多種食品以及人體內都含有谷氨酸鹽,它即是蛋白質或肽的結構氨基酸之一,又是游離氨基酸,L型氨基酸美味較濃。
3、谷氨酸為世界上氨基酸產量最大的品種,作為營養葯物可用於皮膚和毛發。用於生發劑,能被頭皮吸收,預防脫發並使頭發新生,對毛乳頭、毛母細胞有營養功能,並能擴張血管,增強血液循環,有生發防脫發功效。用於皮膚,對治療皺紋有療效。
4、L-谷氨酸主要用於生產味精、香料,以及用作代鹽劑、營養增補劑和生化試劑等。L-谷氨酸本身可用作葯物,參與腦內蛋白質和糖的代謝,促進氧化過程,該品在體內與氨結合成無毒的谷醯胺,使血氨下降,減輕肝昏迷症狀。
(3)天津谷氨酸含量試劑盒如何購買擴展閱讀:
下游產品開發:
1、乙醇和L—谷氨酸直接酯化保護羧基,用三光氣活化成其相應的N—羧酸酐,可直接得到側鏈具有一定反應活性的聚L—氯乙基谷氨酸酯。
2、谷氨酸的結構中有一個氨基和兩個羧基,在光氣的作用之下,羧基和氨基會形成環狀N—羧酸酐,由於羧基也較為活潑,可能會參與成環反應、
在成環反應之前,通常用苄醇將羧基進行保護,這樣得到的聚合物的側鏈活性極低,一般需經進一步氫化脫苄或胺解脫苄,才能得到有反應活性的側鏈,我們選用雙功能基試劑氯乙醇作保護基因,在聚合之後可直接得到有反應活性的側鏈,可有效地簡化合成路線。
3、側鏈酯化過程是一個可逆反應,隨著體系內水含量的不斷增加,反應速度會降低,導致產率不高。在形成谷氨酸苄酯時,採用分子篩脫水,操作大大簡化。
新型的聚合氨基酸,含有氨基的葯物或靶向基因,可以方便的接入聚谷氨酸的分子中,形成大分子前葯或靶向大分子載體,接入特異性的基因,可進行特殊的分離或提純,這一聚合物在醫葯領域會有很廣泛的應用前景。
參考資料來源:網路-谷氨酸
⑷ 谷氨酸是什麼
谷氨酸,是一種酸性氨基酸。分子內含兩個羧基,化學名稱為α-氨基戊二酸。谷氨酸是里索遜1856年發現的,為無色晶體,有鮮味,微溶於水,而溶於鹽酸溶液,等電點3.22。大量存在於谷類蛋白質中,動物腦中含量也較多。谷氨酸在生物體內的蛋白質代謝過程中占重要地位,參與動物、植物和微生物中的許多重要化學反應。味精中含少量谷氨酸。
⑸ 誰能提供谷氨酸合成酶GOGAT活性的測定方法,簡單易行的
本發明涉及一種酶比色法測定谷氨酸濃度的方法及谷氨酸診斷試劑盒,運用谷氨酸脫氫酶酶促反應速率比色法/終點法。谷氨酸脫氫酶酶解谷氨酸,同時將輔酶(在340nm處沒有吸收峰)還原成為還原型輔酶(在340nm處有吸收峰),從而得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度上升的程度/速度,通過測量340nm處吸光度上升的程度/速度,可以測算谷氨酸的濃度大小。該方法特異性高,不受內、外源物質的污染,測試結果精確、准確性好。將診斷試劑盒製成雙劑可減少各成分的交叉影響,保持試劑的穩定性。本發明完全可以通過紫外/可見光分析儀器得出所需的測定結果,便於推廣應用。有此類產品! http://zhuanli..com/pages/sipo/20071002/47/_0.htm
⑹ 谷氨酸鈉是什麼添加劑
就是常用的味精
谷氨酸鈉(C5H8NNaO4),化學名α-氨基戊二酸一鈉,是谷氨酸的鈉鹽。
物理性質
外觀:無色至白色稜柱狀結晶或白色結晶性粉末,水溶液無色
熔點:225℃
氣味:基本無特殊氣味(味覺閾值0.014%)
味覺:具有強烈的肉類鮮味,略有甜味或鹹味
光學活性:谷氨酸鈉分子結構中含有一個不對稱碳原子,具有光學活性,能使偏振光面旋轉一定角度
可溶性:易溶於水,微溶於乙醇,不溶於乙醚
溶解性(水):10 g/100 mL(冷水),71.7g/100mL(熱水)
化學性質
穩定性:對光和熱穩定,10%水溶液在pH值6.9時通氣條件下100℃加熱3h分解率約0.6%。加熱至120℃脫水縮合。在酸性環境中,谷氨酸鈉會生成谷氨酸或谷氨酸鹽酸鹽;在鹼性環境中,谷氨酸鈉會起化學反應產生一種叫谷氨酸二鈉的物質。
毒性:食用味精在正常范圍內不會對健康有任何損害,但食用過多會使部分人出現頭痛,面紅,多汗,面部壓迫或腫脹,口部或口周麻木、胃部燒灼感及胸痛等中毒症狀,中毒以後可每天口服50毫克維生素B6緩解症狀。
應用領域
調味劑
做調味劑使用時,一般用量為0.2%~0.5%。除單獨使用外,宜與核糖核苷酸和肌苷酸鈉之類核酸類調味料配成復合調味料,以提高效果。谷氨酸鈉是國內外應用最為廣泛的鮮昧劑,與食鹽共存時可增強其呈味作用,與5'-肌苷酸鈉或5'-鳥苷酸鈉一起使用,更有相乘的作用。我國規定可在各類食品按生產需要適量使用。
谷氨酸鈉具有強烈的肉類鮮味,味精用水稀釋至3000倍仍可感覺到鮮味,廣泛用於家庭,飲食業、食品加工業(湯、香腸、魚糕、辣醬油、罐頭等)。鳥苷酸鈉與谷氨酸鈉同時使用,具有協同作用,能提高鮮味,又稱助鮮劑或強力味精。
醫葯用生化試劑
谷氨酸廣泛存在於動植物的機體中,是食品中天然存在的營養成份。谷氨酸食用後,有96%在體內被吸收,其餘氧化後在尿中排出。谷氨酸雖然不是人體必需的氨基酸,但在氮代謝中與酮酸發生氨基轉移作用,能合成其它氨基酸。谷氨酸有降低血液中毒素的作用。當肝功能受損時,血液中含氨量增高,引起嚴重的氮代謝紊亂,導致肝昏迷,而谷氨酸能與氨起作用,降低血液中氨的含量。另外,腦組織只能氧化谷氨酸,而不能氧化其他的氨基酸。當葡萄糖供應不足時,谷氨醯胺能起腦組織的能源作用,因此谷氨酸對改進和維持腦機能是必要的。此外,醫葯上用於預防肝昏迷,防止癲癇也可用作腦營養劑。
⑺ 如何用液相色譜儀測氨基酸
反相高效液相色譜法測定煙葉中的游離氨基酸
氨基酸是煙草中的一類重要化學物質,在煙草調制、醇化或發酵、加工直至燃燒過程中,游離氨基酸與還原糖之間可發生酶催化及非酶催化的棕色化反應,生成多種具有蒸煮、烤香、爆米花香味特徵的吡喃、吡嗪、吡咯、吡啶類等雜環化合物,某些氨基酸如苯丙氨酸還可自身分解成香味化合物,如苯甲醇、苯乙醇等。氨基酸含量與煙草製品的吃味有著密切的關系,氨基酸在燃燒裂解過程中一般形成具有刺激性的含氮化合物,對煙氣香吃味產生不良影響,個別氨基酸還產生HCN等危害健康的煙氣成分。一般說來,氨基酸含量太高,煙氣辛辣、味苦、刺激性強烈;含量太低時煙氣則平淡無味缺少豐滿度。因此對氨基酸的分析是一項很有意義的工作,二十世紀60年代以來,國內外在這方面做了大量的工作[1-5]。
植物游離氨基酸樣品的制備,國內外採用的提取劑和純化方法各不相同。據文獻報道[6-7],鹽酸、不同濃度的乙醇溶液均可以用來提取植物組織中的游離氨基酸;提取液純化則有用陽離子交換樹脂、5%磺基水楊酸、活性炭或乙醚等方法。本實驗對不同的提取方式和不同的純化方法進行了對比研究,確定提取煙葉中游離氨基酸的較佳提取劑和純化方法。提取、純化後的樣品,採用OPA、FMOC聯合柱前衍生反相高效液相色譜法對煙葉中的游離氨基酸進行了測定。該方法使帶氨基和亞氨基基團的氨基酸能夠被同時測定,且得到較好的定性定量結果。
1 實驗
1.1 儀器
Agilent公司HP1100型高效液相色譜儀(帶可變波長紫外檢測器和自動進樣器),PE公司Lambda Bio40 紫外-可見分光光度計。
1.2 試劑
正纈氨酸(Norvaline,內標),OPA ,FMOC,均為色譜純,Agilent公司提供;硼酸緩沖溶液,Agilent公司提供;
醋酸鈉(NaAc),分析純,中國醫葯(集團)上海化學試劑公司;三乙胺(TEA),四氫呋喃(THF),乙腈(CH3CN),甲醇(MeOH),均為色譜純,Fisher公司試劑;
氨基酸標樣包括:天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、天冬醯胺(Asn)、谷氨醯胺(Gln)、絲氨酸(Ser)、組氨酸(His)、甘氨酸(Gly)、蘇氨酸(Thr)、丙氨酸(Ala)、精氨酸(Arg)、酪氨酸(Tyr)、胱氨酸(Cys)、纈氨酸(Val)、蛋氨酸(Met)、苯丙氨酸(Phe)、異亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、脯氨酸(Pro),均為生化試劑,中國醫葯(集團)上海化學試劑公司;
苯乙烯陽離子交換樹脂(732型),天津樹脂廠。
1.3 樣品處理
將煙葉在烘箱中恆溫40℃烘乾至恆重,粉碎,過80目篩,篩下物為實驗用煙樣粉末,置於廣口瓶中備用。准確稱取煙樣粉末1.000g於乾燥的潔凈試管中,用一定濃度的乙醇溶液室溫超聲波提取半小時,過濾,相同濃度的乙醇溶液洗滌,再提取一次,合並後的濾液用陽離子交換柱洗脫,然後用95ml 4mol/L氨水淋洗陽離子交換柱,淋洗液恆溫濃縮至干,最後用3ml 0.1mol/L稀鹽酸溶液溶解濃縮物,將此溶液離心分離20min,0.45μm微孔濾膜過濾,加入濃度為5nmol/μ1的內標10μ1,定容至50ml,HP1100液相色譜儀進行氨基酸分析。
樣品自動柱前衍生化:Agilent公司G1313A自動進樣器進樣。程序為:吸取5μl硼酸緩沖液,再吸取1μ1 OPA試劑,洗針一次,吸取樣品2μl,原位混合6次。吸取1μl FMOC試劑,洗針一次,原位混合3次,進樣。
1.4 色譜條件
色譜柱:Hypersil AA-ODS C18 2.1×200mm
流動相A:1.36±0.025g醋酸鈉,加入500ml純水溶解,加90μl三乙胺,用1%醋酸調pH=7.20±0.05,再加入1.5ml四氫呋喃,混合均勻。
流動相B:1.36±0.025g醋酸鈉,加入100ml純水溶解,用1%醋酸調pH=7.20±0.05,將此溶液加至200ml乙腈和200ml甲醇的混合物中,並混合均勻。
流速:0.45ml/min
柱溫:40℃
紫外檢測波長: 0~16min, 338nm; 16~25min,262nm
淋洗梯度:見表1
表1 流動相的淋洗梯度表
Table 1 The gradient time table of mobile phase
序列 時間(min) 流動相A(%) 流動相B(%) 流速(ml/min)
1 0.00 100.0 0.0 0.450
2 15.50 40.0 60.0 0.450
3 18.00 0.0 100.0 0.450
4 21.00 0.0 100.0 0.800
5 23.90 0.0 100.0 0.800
6 24.00 0.0 100.0 0.450
7 25.00 100.0 0.0 0.450
1.5 氮基酸的定性
用標樣色譜圖、文獻參照和標樣加入的方法,通過對照保留時間進行定性,對氨基酸的出峰順序加以確認。
1.6 內標法定量
准確移取濃度為10 pmol/μ1、25 pmol/μ1、50 pmol/μ1、100 pmol/μ1、250 pmol/μ1、500 pmol/μ1、1000 pmol/μ1的氨基酸混合標樣100μl於帶內襯管的樣品瓶中,再加入250pmol/μ1內標溶液100μl,充分混合,液相色譜分析,儀器自動計算各氨基酸的標准曲線。
2 結果與討論
2.1 萃取溶劑的比較
氨基酸可溶解於水、乙醇、甲醇、稀酸等,因此它們均可作為煙葉中游離氨基酸的萃取溶劑,傳統的方法是用乙醇和0.1mol/L的鹽酸。實驗發現,乙醇和0.1mol/L的鹽酸萃取方法比較,提取出的煙葉中的游離氨基酸的總量變化不大,但用鹽酸提取的樣品分析時RSD%較大,平均8.51%,其中超過10%的有4個,甘氨酸的RSD%最大為20%;而用乙醇提取的樣品分析時RSD%相對較小,平均5.12%,超過10%的只有1個。而且鹽酸提取液過濾速度慢,需要30-40min,而乙醇提取液過濾只需10min左右;因此,本實驗選擇乙醇作為煙葉中游離氨基酸的萃取溶劑。
2.2 乙醇濃度的選擇
選擇五種不同濃度的乙醇溶液進行了煙樣中游離氨基酸的提取,測定不同條件下提取液中游離氨基酸的總量,結果如圖1。圖中顯示,在乙醇溶液濃度為80%時,煙樣中總游離氨基酸的提取量最大。而且不同濃度下游離氨基酸的RSD%沒有明顯的變化,因此,選擇80%的乙醇溶液來進行煙樣中游離氨基酸的提取。
2.3 不同純化方法的確定
在最佳乙醇溶液濃度下,分別用活性炭加入提取液吸附雜質、乙醚加入提取液萃取分離雜質、5%磺基水楊酸加入提取液沉澱去除雜質和陽離子交換樹脂吸附雜質四種方法進行了純化實驗。結果發現,活性炭作為純化劑時其色譜圖中雜質峰較少,但同時氨基酸峰亦有多個消失,主要是因為活性炭對氨基酸也有較強的吸附,它在吸附雜質的同時也吸附了需要檢測的氨基酸,故活性炭不適合作為純化劑使用。乙醚和5%磺基水楊酸作為純化劑時,雜質去除不完全,其色譜圖均表現為雜質峰較多,湮沒了大量氨基酸峰,且基線漂移嚴重,給定性定量工作帶來困難。當用陽離子交換樹脂進行純化時,其色譜圖中雜質峰較少,基線平穩,氨基酸峰分離較好,均可以進行定性和定量分析,故本實驗選擇了陽離子交換樹脂作為純化手段。
2.4 色譜分離
2.5 線性范圍及標准曲線
分別取濃度為10 pmol/μ1、25 pmol/μ1、50 pmol/μ1、100 pmol/μ1、250 pmol/μ1、500 pmol/μ1、1000 pmol/μ1的氨基酸混合標樣加入等體積的250 pmol/μ1的內標溶液,進行HPLC分析,以氨基酸濃度為橫坐標,氨基酸與內標的面積比為縱坐標,得到各個氨基酸的標准曲線,如表2所示。從表中可以看出,各氨基酸在10-1000 pmol/μ1的濃度范圍內均有良好的線性,各氨基酸標准曲線的線性相關系數均大於0.99。
表2 氨基酸的標准曲線
Table 2 Standard curves of 17 amino acids
氨基酸 線性方程 相關系數
Asp Y=0.007037x+0.004689 0.9972
Glu Y=0.007520x+0.005375 0.9961
Ser Y=0.006903x+0.038212 0.9988
His Y=0.003719x+0.020168 0.9945
Gly Y=0.005851x+0.018235 0.9966
Thr Y=0.006932x+0.021072 0.9978
Ala Y=0.006275x+0.015314 0.9912
Arg Y=0.006088x+0.016113 0.9920
Tyr Y=0.006734x+0.015022 0.9993
Cys Y=0.006004x+0.009876 0.9985
Val Y=0.006432x+0.009932 0.9927
Met Y=0.006574x+0.010346 0.9905
Phe Y=0.005098x+0.019023 0.9962
Ile Y=0.005976x+0.016235 0.9953
Leu Y=0.006044x+0.015332 0.9964
Lys Y=0.006833x+0.010437 0.9969
Pro Y=0.022455x+0.009376 0.9922
2.6 重現性實驗
取雲南C2F99煙樣做平行實驗(n=5),進行煙葉中游離氨基酸含量的檢測,結果發現: Asp和 Glu含量的RSD%分別為8.0%和8.6%,這可能是二者的分離度不高引起的;His的RSD%為9.0%,這可能與其含量較低,分離效果不好有關。其它氨基酸含量的RSD%均處在3%~7%。
2.7 回收率實驗
用標樣加入法進行回收率實驗,結果見表3。 Thr的回收率僅為68.0%,原因可能與其含量較少有關;其它15種氨基酸的回收率在81.0%~110.5%,平均回收率為93.9%,說明該方法的回收率結果令人滿意。
表3 分析方法的回收率
Table 3 Recovery percents of the analytical method
氨基酸 加入量(mg/g煙樣) 樣品含量(mg/g煙樣) 測定值(mg/g煙樣) 差值(mg/g煙樣) 回收率%
Asp 0.200 0.320 0.499 0.179 89.5
Glu 0.200 0.309 0.484 0.175 87.5
Asn 0.200 0.986 1.208 0.222 110.0
Ser 0.200 0.172 0.334 0.162 81.0
Gln 0.200 0.186 0.368 0.182 91.0
His 0.200 0.106 0.297 0.191 95.5
Gly 0.200 0.064 0.279 0.215 107.5
Thr 0.200 0.052 0.188 0.136 68.0
Ala 0.200 0.642 0.835 0.193 96.5
Arg 0.200 0.266 0.463 0.197 98.5
Val 0.200 0.090 0.259 0.169 84.5
Phe 0.200 0.218 0.406 0.188 94.0
Ile 0.200 0.026 0.191 0.165 82.5
Leu 0.200 0.028 0.199 0.171 85.5
Pro 0.200 1.432 1.653 0.221 110.5
Tyr 0.200 0.062 0.245 0.183 91.5
2.8 樣品分析
利用該方法對不同等級的煙葉中游離氨基酸的含量進行了分析,結果見表4。從表中可以看出,在所分析的樣品中,烤煙煙葉中含量最高的氨基酸是Pro,白肋煙煙葉中含量最高的氨基酸是Asp和Asn;白肋煙煙葉中氨基酸的含量高於烤煙煙葉;相同等級的烤煙煙葉,雲南煙葉中的氨基酸含量高於其它產區。
表4 不同等級煙葉中游離氨基酸的含量(mg/g煙樣)
Table 4 Amounts of free amino acids in different
grade tobacco leaves(mg/g tobacco leaves)
氨基酸 雲南烤煙C1F 雲南烤煙C2F 雲南烤煙C1L 雲南烤煙B1F 雲南烤煙B2F 福建烤煙B1F 福建烤煙C1F 四川烤煙C1F 四川烤煙B1F 貴州烤煙C1F 貴州烤煙B1F 貴州烤煙C1L 鄂西白肋中一 鄂西白肋中二
Asp 0.24 0.31 0.60 0.40 0.38 0.37 0.26 0.37 0.26 0.26 0.32 0.35 1.73 1.59
Glu 0.36 0.32 0.21 0.17 0.16 0.11 0.15 0.20 0.30 0.32 0.29 0.25 0.54 0.61
Asn 0.91 0.34 1.50 0.95 0.38 0.18 0.25 0.35 0.32 0.44 0.55 0.48 7.70 7.62
Ser 0.16 0.10 0.18 0.16 0.10 0.12 0.24 0.21 0.19 0.20 0.19 0.15 0.62 0.58
Gln 0.19 0.05 0.22 0.17 0.04 0.06 0.10 0.11 0.10 0.11 0.15 0.10 0.18 0.20
His 0.11 0.02 0.14 0.10 0.06 0.06 0.11 0.09 0.07 0.09 0.08 0.09 0.20 0.22
Gly 0.10 0.09 0.19 0.17 0.07 0.08 0.12 0.15 0.12 0.15 0.13 0.12 0.16 0.19
Thr 0.05 0.05 0.08 0.06 0.05 0.04 0.08 0.09 0.08 0.07 0.06 0.05 0.19 0.16
Ala 0.65 0.55 0.84 0.69 0.54 0.51 0.65 0.59 0.55 0.48 0.53 0.70 0.57 0.55
Arg 0.29 0.21 0.32 0.28 0.18 0.26 0.32 0.28 0.25 0.33 0.29 0.33 0.48 0.42
Tyr 0.06 0.07 0.06 0.07 0.06 0.05 0.07 0.05 0.06 0.06 0.07 0.06 0.10 0.15
Val 0.10 0.10 0.12 0.11 0.10 0.14 0.15 0.13 0.12 0.15 0.14 0.13 0.21 0.25
Met 0.07 0.07 0.09 0.08 0.06 0.06 0.08 0.08 0.08 0.07 0.09 0.08 0.12 0.13
Phe 0.26 0.12 0.28 0.23 0.10 0.21 0.25 0.21 0.25 0.28 0.30 0.33 0.44 0.59
Pro 1.14 0.83 2.13 1.51 0.69 0.66 1.03 1.23 1.11 1.32 1.18 1.09 0.25 0.35
總量 4.69 3.23 6.96 5.15 2.97 2.91 3.86 4.14 3.86 4.33 4.37 4.31 13.49 13.61
3 結論
本煙葉中游離氨基酸的分析方法採用80%的乙醇作為萃取溶劑,陽離子交換樹脂對提取液進行純化,能夠最大程度地提取煙葉中的游離氨基酸並較好地去除了影響氨基酸測定的雜質,使色譜圖中雜質峰較少;OPA、FMOC聯和柱前衍生使帶氨基和亞氨基基團的氨基酸同時得到測定;良好的梯度洗脫使各個氨基酸峰得到較好的分離,並使定量結果更加可靠。
⑻ 有些膠原蛋白的產品說羥脯氨酸的含量高,羥脯氨酸是什麼東東
羥脯氨酸主要存在於動物的膠原蛋白中,其它蛋白質中基本不含羥脯氨。羥脯氨酸就是膠原蛋白的標志性成分——人體內要合成膠原蛋白,羥脯氨酸必不可少。同時羥脯氨酸在人體的代謝過程中,能起到乳化脂肪的作用,所以合理的補充膠原蛋白是有瘦身作用的。好的膠原蛋白一般來說羥脯氨酸的含量較高。
但千萬不要因為膠原蛋白有瘦身作用而大量補充,過量補充膠原蛋白是會導致發胖的。因為過量補充的那部分身體吸收利用不了就會轉化為脂肪糖類。
⑼ 谷氨酸和谷氨醯胺的理化性質區別及判斷
這個問題應該很簡單,但是不是俺的強項,我生化爛死了
查了下醯胺的化學性質,其近中性,與亞硝酸作用生成相應的羧酸,並放出氮氣。也就是說可以利用這個來做鑒別,加亞硝酸若有氣體生成則是谷氨醯胺;
然後谷氨酸含有兩個羧基,其酸性對於後者要強,但是其又較難溶,所以你可以用熱水溶解2者,然後測其PH,較低的那個是谷氨酸。
還有就是谷氨酸有鮮味,可以通過味覺判斷,當然前提是我們知道這兩種物質都是無毒的
還有就是有個叫霍夫曼反應的
在氫氧化鈉水溶液中,非取代醯胺與鹵素作用,醯胺分子失去羰基,生成比原醯胺少一個碳原子的伯胺,此反應稱霍夫曼降解反應.
可以根據這個反應設計實驗,來區分。
能幫你找到的只有這么多了,如果你可以查找生物化學的書本的話,還可以根據其理化性質多做點研究,希望這些能幫到你
丫咋找到我回答這個問題呢?莫莫
⑽ 今天做了個efg腦神經檢測儀 Y-氨基丁酸 谷氨酸 乙醯膽鹼很低 5-羥色胺 興奮遞質3 多巴胺
意見建議:
由於每個醫院的實驗設備,試劑不同,正常參考值也有一定的差異,你的檢查結果,建議咨詢你的經治醫生。祝您健康.